作者icome (木村阿宅)
看板Biotech
標題Re: [求救] Coating Matrigel的疑問
時間Mon Oct 26 19:03:32 2009
拍謝 自己回自己文
在一次偶然的google中，我找到答案囉!!
http://cancerres.aacrjournals.org/cgi/reprint/54/13/3620.pdf
1994年的paper 日本人想出來的
主要原理是在well壁上塗上石蠟，由於石蠟忌水的性質，會減低液體的附著力，
所以液面不會形成凹陷，讓gel鋪得更加平整。
最簡單的石蠟來源就是蠟燭，把蠟油滴在細長的工具末端(我是用拉開的迴紋針)，
然後伸進去well塗抹，再用棉花棒把削渣弄掉。
以上，給有相同問題的人參考!!
※ 引述《icome (木村阿宅)》之銘言：
: 各位好~
: 我要做invasion assay，但是一直沒辦法很穩定地把matrigel coating好，
: 常常會有細胞集中在中間的情況，可能是gel黏在外圍，導致中間有凹陷。
: 我目前coating的方法:
: 1. 就每一well而言，將3ul matrigel稀釋在100ul的純水中。
: 2. 稀釋均勻後加入transwell中，自然風乾或是包好放進烘箱乾燥。
: 3. 放冰箱保存，之後直接使用。
: 我觀察到液面會因為附著力大於內聚力，而有凹面產生，是否因為這樣導致
: gel呈現盆地地形，所以細胞才會集中在中間?
: 另一種方法是直接把十分之一稀釋的matrigel加進去(30ul)，可是這種方式一樣
: 容易發生gel黏聚外壁的情形。
: 另外，有的protocol會寫 "After coating, aspirate excess matrigel" 那是指什麼?
: 讓matrigel沉澱然後吸掉上清液的意思嗎?
: 請問我的作法要如何改進? 希望高手們分享自己的經驗和做法，感謝回答!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：推 nk12914:所以原PO後來有解決問題了嗎?因為我也有同樣的困擾 囧 10/26 19:58
2F：推 core308:這樣會是無菌的嗎？ 10/26 23:29
3F：推 SugarSa:為什麼不在well裡面放一個略小的圓形玻片，然後coating在 10/27 09:44
4F：→ SugarSa:玻片上？這樣會附蓋過整個玻片又不會黏到well壁 10/27 09:44
5F：→ SugarSa:我們是這樣做的，用稀釋的Matrigel coat在玻片上 10/27 09:45
6F：→ SugarSa:過一段時間再把Matrigel吸掉 10/27 09:46
7F：→ icome:蠟燭燃燒可以殺掉大部分的菌 但可能無法完全無菌... 10/27 12:35
8F：→ icome:但這篇paper用這方法做了一串實驗 證明可行性 10/27 12:36
9F：→ icome:coat在玻片上?不太瞭囧 我是要做invasion要coat在filter上 10/27 12:43
10F：→ icome:目前我用這方法做了 液面很平應該OK 10/27 12:45
11F：→ icome:至於無菌問題 我只放24h就收了 所以問題不大 10/27 12:46
12F：→ icome:如果是要收下層細胞後續培養 是否無菌就是很大的問題 10/27 12:47
※ 編輯: icome 來自: 140.112.121.97 (10/27 12:49)
13F：推 SugarSa:呵，那可能是我沒做invasion實驗搞烏龍了 10/27 14:56