作者icome (木村阿宅)
看板Biotech
标题Re: [求救] Coating Matrigel的疑问
时间Mon Oct 26 19:03:32 2009
拍谢 自己回自己文
在一次偶然的google中，我找到答案罗!!
http://cancerres.aacrjournals.org/cgi/reprint/54/13/3620.pdf
1994年的paper 日本人想出来的
主要原理是在well壁上涂上石蜡，由於石蜡忌水的性质，会减低液体的附着力，
所以液面不会形成凹陷，让gel铺得更加平整。
最简单的石蜡来源就是蜡烛，把蜡油滴在细长的工具末端(我是用拉开的回纹针)，
然後伸进去well涂抹，再用棉花棒把削渣弄掉。
以上，给有相同问题的人参考!!
※ 引述《icome (木村阿宅)》之铭言：
: 各位好~
: 我要做invasion assay，但是一直没办法很稳定地把matrigel coating好，
: 常常会有细胞集中在中间的情况，可能是gel黏在外围，导致中间有凹陷。
: 我目前coating的方法:
: 1. 就每一well而言，将3ul matrigel稀释在100ul的纯水中。
: 2. 稀释均匀後加入transwell中，自然风乾或是包好放进烘箱乾燥。
: 3. 放冰箱保存，之後直接使用。
: 我观察到液面会因为附着力大於内聚力，而有凹面产生，是否因为这样导致
: gel呈现盆地地形，所以细胞才会集中在中间?
: 另一种方法是直接把十分之一稀释的matrigel加进去(30ul)，可是这种方式一样
: 容易发生gel黏聚外壁的情形。
: 另外，有的protocol会写 "After coating, aspirate excess matrigel" 那是指什麽?
: 让matrigel沉淀然後吸掉上清液的意思吗?
: 请问我的作法要如何改进? 希望高手们分享自己的经验和做法，感谢回答!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：推 nk12914:所以原PO後来有解决问题了吗?因为我也有同样的困扰 囧 10/26 19:58
2F：推 core308:这样会是无菌的吗？ 10/26 23:29
3F：推 SugarSa:为什麽不在well里面放一个略小的圆形玻片，然後coating在 10/27 09:44
4F：→ SugarSa:玻片上？这样会附盖过整个玻片又不会黏到well壁 10/27 09:44
5F：→ SugarSa:我们是这样做的，用稀释的Matrigel coat在玻片上 10/27 09:45
6F：→ SugarSa:过一段时间再把Matrigel吸掉 10/27 09:46
7F：→ icome:蜡烛燃烧可以杀掉大部分的菌 但可能无法完全无菌... 10/27 12:35
8F：→ icome:但这篇paper用这方法做了一串实验 证明可行性 10/27 12:36
9F：→ icome:coat在玻片上?不太了囧 我是要做invasion要coat在filter上 10/27 12:43
10F：→ icome:目前我用这方法做了 液面很平应该OK 10/27 12:45
11F：→ icome:至於无菌问题 我只放24h就收了 所以问题不大 10/27 12:46
12F：→ icome:如果是要收下层细胞後续培养 是否无菌就是很大的问题 10/27 12:47
※ 编辑: icome 来自: 140.112.121.97 (10/27 12:49)
13F：推 SugarSa:呵，那可能是我没做invasion实验搞乌龙了 10/27 14:56