作者icome (木村阿宅)
看板Biotech
標題[求救] Coating Matrigel的疑問
時間Fri Oct 23 18:58:10 2009
各位好~
我要做invasion assay，但是一直沒辦法很穩定地把matrigel coating好，
常常會有細胞集中在中間的情況，可能是gel黏在外圍，導致中間有凹陷。
我目前coating的方法:
1. 就每一well而言，將3ul matrigel稀釋在100ul的純水中。
2. 稀釋均勻後加入transwell中，自然風乾或是包好放進烘箱乾燥。
3. 放冰箱保存，之後直接使用。
我觀察到液面會因為附著力大於內聚力，而有凹面產生，是否因為這樣導致
gel呈現盆地地形，所以細胞才會集中在中間?
另一種方法是直接把十分之一稀釋的matrigel加進去(30ul)，可是這種方式一樣
容易發生gel黏聚外壁的情形。
另外，有的protocol會寫 "After coating, aspirate excess matrigel" 那是指什麼?
讓matrigel沉澱然後吸掉上清液的意思嗎?
請問我的作法要如何改進? 希望高手們分享自己的經驗和做法，感謝回答!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：推 musicman:實驗前一天 把所有會跟matrigel接觸的容器(wll,tube)都放 10/24 14:23
2F：→ musicman:4度C冰箱中,你的稀釋用水..有試過用medium稀釋看看嘛? 10/24 14:24
3F：→ musicman:96-well ->50ul/well , loading完matrigel後 在well邊緣 10/24 14:26
4F：→ musicman:一圈加上 1xPBS 潤濕 之後放入37度C培養箱 凝膠 10/24 14:27
5F：→ untilnow:放 冰箱一天 ＋1 10/24 23:14
6F：→ icome:OK 我試試看 10/26 10:32