作者icome (木村阿宅)
看板Biotech
标题[求救] Coating Matrigel的疑问
时间Fri Oct 23 18:58:10 2009
各位好~
我要做invasion assay，但是一直没办法很稳定地把matrigel coating好，
常常会有细胞集中在中间的情况，可能是gel黏在外围，导致中间有凹陷。
我目前coating的方法:
1. 就每一well而言，将3ul matrigel稀释在100ul的纯水中。
2. 稀释均匀後加入transwell中，自然风乾或是包好放进烘箱乾燥。
3. 放冰箱保存，之後直接使用。
我观察到液面会因为附着力大於内聚力，而有凹面产生，是否因为这样导致
gel呈现盆地地形，所以细胞才会集中在中间?
另一种方法是直接把十分之一稀释的matrigel加进去(30ul)，可是这种方式一样
容易发生gel黏聚外壁的情形。
另外，有的protocol会写 "After coating, aspirate excess matrigel" 那是指什麽?
让matrigel沉淀然後吸掉上清液的意思吗?
请问我的作法要如何改进? 希望高手们分享自己的经验和做法，感谢回答!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：推 musicman:实验前一天 把所有会跟matrigel接触的容器(wll,tube)都放 10/24 14:23
2F：→ musicman:4度C冰箱中,你的稀释用水..有试过用medium稀释看看嘛? 10/24 14:24
3F：→ musicman:96-well ->50ul/well , loading完matrigel後 在well边缘 10/24 14:26
4F：→ musicman:一圈加上 1xPBS 润湿 之後放入37度C培养箱 凝胶 10/24 14:27
5F：→ untilnow:放 冰箱一天 ＋1 10/24 23:14
6F：→ icome:OK 我试试看 10/26 10:32