作者BuSmall (Bu)
看板Biotech
標題[求救] western
時間Wed Oct 21 20:53:58 2009
最近跑western用了一支新的抗體
sample分別是cell lysate和從tissue抽出來的protein
壓片完發現cell lysate的band和tissue的band差了大概20 KDa
正常來說不是應該要一樣嗎?
請問有人遇到這問題過嗎?
謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.178
1F：推 tsubasawolfy:找PAPER看看你的蛋白有沒有PTM? 10/21 20:56
2F：→ tsubasawolfy:沒有的話做IP後打MASS 如果兩個是同樣的話...應該就 10/21 20:57
3F：→ tsubasawolfy:不用擔心畢業問題了? 10/21 20:57
4F：推 xenosdk:請去swissport確認一下alternative splicing 10/21 21:14
5F：→ BuSmall:PTM在cell和在tissue會不一樣嗎? 10/21 21:20
6F：→ Anvec:PTM應該不會差那麼多吧 @.@a 20kDa ? 10/21 23:14
7F：→ rimeni:SUMO就是差20kD 10/22 01:15
8F：推 reinherd:你原先的protein mw多少 我之前遇到過差一倍 剛好是dimer 10/22 03:16
9F：→ reinherd:會不會你的ab specificity不夠 抓到其他蛋白質 10/22 03:17
10F：→ reinherd:有沒有multiple band, 還是只是單一band? 10/22 03:17
11F：→ reinherd:我建議你找你老闆討論 或是把照片上傳上來 ps 這年頭還有 10/22 03:18
12F：→ reinherd:人在壓片阿～～＠＠ ? 10/22 03:18
13F：推 xenosdk:我也還在壓 實驗室裡有gel doc可是沒有人喜歡用 10/22 08:56
14F：→ chvkimo:底片壓的sensitivity 比較高阿 機器照的background會偏高 10/22 11:46
15F：→ chvkimo:各有利弊 10/22 11:47