作者eno819 (eno)
看板Biotech
標題[求救] 使用限制脢酵素切DNA很一直切不到
時間Tue Oct 20 19:09:54 2009
請問一下神通廣大的鄉民
我是做phage方面的實驗,日前老師拿了一個phage代號是fUSE55
它的NCBI編號是AF218364
由於我要把一段insert接上去,使用的限制脢是sfi1<切位:GGCCNNNNNGGCC>
我要先切fUSE55 條件設在50度 加入fUSE55的DNA量是0.2μg/μl
問題來了
我一開始是先加20μl的DNA, 1μl酵素, 總體積30 切overnight結果整個切碎了
我就開始調整時間切4小時以上就很容易切碎
切3小時以下又很難切到
切3-4小時又好像部分碎掉 部分沒切到
用其他的酵素也是差不多的結果
請問切RE有什麼要注意的嗎
還是有什麼方法 可以提供一下
中間也有調整酵素加入的量以及DNA加入的量 但結果也是差不多
希望板上神人可以給的建議
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◆ From: 140.127.215.56
※ 編輯: eno819 來自: 140.127.215.56 (10/20 19:11)
1F：→ nike77114:可以稍稍註解是哪一家的enzyme嗎＠＠？ 10/20 21:21
2F：推 jck0406:原來有限制酶是認單數nuleotide，我還以為都認偶數(筆記.) 10/20 23:07
3F：→ eno819:我使用的酵素是NEB的 10/21 00:19
4F：→ ksn:請問有電泳圖嗎? 另外其他的酵素用了哪些呢?沒切到看起來band 10/21 01:01
5F：→ ksn:的情況是如何呢?? 10/21 01:02