作者eno819 (eno)
看板Biotech
标题[求救] 使用限制脢酵素切DNA很一直切不到
时间Tue Oct 20 19:09:54 2009
请问一下神通广大的乡民
我是做phage方面的实验,日前老师拿了一个phage代号是fUSE55
它的NCBI编号是AF218364
由於我要把一段insert接上去,使用的限制脢是sfi1<切位:GGCCNNNNNGGCC>
我要先切fUSE55 条件设在50度 加入fUSE55的DNA量是0.2μg/μl
问题来了
我一开始是先加20μl的DNA, 1μl酵素, 总体积30 切overnight结果整个切碎了
我就开始调整时间切4小时以上就很容易切碎
切3小时以下又很难切到
切3-4小时又好像部分碎掉 部分没切到
用其他的酵素也是差不多的结果
请问切RE有什麽要注意的吗
还是有什麽方法 可以提供一下
中间也有调整酵素加入的量以及DNA加入的量 但结果也是差不多
希望板上神人可以给的建议
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◆ From: 140.127.215.56
※ 编辑: eno819 来自: 140.127.215.56 (10/20 19:11)
1F：→ nike77114:可以稍稍注解是哪一家的enzyme吗＠＠？ 10/20 21:21
2F：推 jck0406:原来有限制酶是认单数nuleotide，我还以为都认偶数(笔记.) 10/20 23:07
3F：→ eno819:我使用的酵素是NEB的 10/21 00:19
4F：→ ksn:请问有电泳图吗? 另外其他的酵素用了哪些呢?没切到看起来band 10/21 01:01
5F：→ ksn:的情况是如何呢?? 10/21 01:02