作者nidus (咕嘰)
看板Biotech
標題[求救] DNA ladder!!!
時間Sat Oct 17 23:13:28 2009
小弟參考版上Seal13的protocol (5456篇)
如下...
1. 1 x 10^6 cell 以trypsin 處理後離心
2. 以PBS wash x2
3. add 1 ml lysis buffer 插冰上45min
4. add 1ml phenol/chloroform ,離心
5. 取上清液加入同體積chloroform ,離心
6. 取上清液,加入兩倍體積100% EtOH, 1/10體積NaoAc
7. 置-70度一小時以上
8. 離心,70% EtOH wash ,離心 ,去除酒精
9. air dry
10. add 100 入 回溶
11. 跑2% agarose
_____________________________________________________
細胞是MCF-7
跑出來後在幾 kbp處有兩條band(有人知道這是啥嗎？ 跑好多次了都看到他們倆)
以下都糊糊的....= =
之後也參考版上的文章以H2O2為positive control
濃度分別做了 2mM , 1mM ,0.5mM
作用時間6小時
也沒有看到DNA ladder
實驗室有人說因為H2O2可能沒有活性了(實驗室那罐是95年的)
叫我買一罐新的做做看（有那麼快失活嗎？？）
想請問有人做過嗎
怎麼做都做不出來真的不知道原因在哪很痛苦
另外除了H2O2
有沒有其他不要太貴的positive control可以用？？
感謝您的耐心與愛心^^
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◆ From: 124.11.66.174
1F：→ lanth:用UV croslinker 120mJ/cm2 收3hr跟6hr 條件可能自己抓一下 10/18 18:57
2F：→ Fourfish:H2O2也太久了 它自身會變水跟氧 再買新的也不是很貴吧@@a 10/18 23:53
3F：推 chvkimo:H2O2保存不好 更快分解~ 要避光 低溫保存 10/19 10:15