作者nidus (咕叽)
看板Biotech
标题[求救] DNA ladder!!!
时间Sat Oct 17 23:13:28 2009
小弟参考版上Seal13的protocol (5456篇)
如下...
1. 1 x 10^6 cell 以trypsin 处理後离心
2. 以PBS wash x2
3. add 1 ml lysis buffer 插冰上45min
4. add 1ml phenol/chloroform ,离心
5. 取上清液加入同体积chloroform ,离心
6. 取上清液,加入两倍体积100% EtOH, 1/10体积NaoAc
7. 置-70度一小时以上
8. 离心,70% EtOH wash ,离心 ,去除酒精
9. air dry
10. add 100 入 回溶
11. 跑2% agarose
_____________________________________________________
细胞是MCF-7
跑出来後在几 kbp处有两条band(有人知道这是啥吗？ 跑好多次了都看到他们俩)
以下都糊糊的....= =
之後也参考版上的文章以H2O2为positive control
浓度分别做了 2mM , 1mM ,0.5mM
作用时间6小时
也没有看到DNA ladder
实验室有人说因为H2O2可能没有活性了(实验室那罐是95年的)
叫我买一罐新的做做看（有那麽快失活吗？？）
想请问有人做过吗
怎麽做都做不出来真的不知道原因在哪很痛苦
另外除了H2O2
有没有其他不要太贵的positive control可以用？？
感谢您的耐心与爱心^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 124.11.66.174
1F：→ lanth:用UV croslinker 120mJ/cm2 收3hr跟6hr 条件可能自己抓一下 10/18 18:57
2F：→ Fourfish:H2O2也太久了 它自身会变水跟氧 再买新的也不是很贵吧@@a 10/18 23:53
3F：推 chvkimo:H2O2保存不好 更快分解~ 要避光 低温保存 10/19 10:15