作者doskoi (doskoi)
看板Biotech
標題[求救]transfection後蛋白質表現不出來
時間Thu Oct 15 05:17:32 2009
最近被這個問困擾了
我將plasmid transfect進293T後
用pcr可以測到mRNA表現
用western卻測不到protein的表現
如果排除掉mRNA sample被plasmid汙染和antibody有問題
還會有其他原因造成這個結果嗎?
p.s.表現的基因是extracellular domain,並不是全長
不過我有去確認過antibody是用這段當antigen做出來的
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.70.57
1F：→ sancra:Ctrl的情形呢? 是否其他細胞株、其他plasmid也這樣? 10/15 09:37
2F：→ sancra:送進去的mRNA 有start coden嗎，in vitro可以合成protein嗎 10/15 09:37
3F：→ Rinehot:建議測試一下antibody 曾有壞掉然後以為沒表現的經驗過 10/15 13:02
4F：→ doskoi:有START CODON...我先確認一下ANTIBODY活性好了 10/15 15:34
5F：推 leoblack:那有stop codon!?in-frame?!先送sequence確定一下比較好~ 10/15 15:47
6F：→ doskoi:stop codon, in frame 都沒問題...有送過定序 10/16 03:00
7F：推 zeroking0519:Kozak sequence?? 10/20 10:25
8F：推 a84539568:有確認過此序列是否有in frame嗎？ 10/24 15:26