作者doskoi (doskoi)
看板Biotech
标题[求救]transfection後蛋白质表现不出来
时间Thu Oct 15 05:17:32 2009
最近被这个问困扰了
我将plasmid transfect进293T後
用pcr可以测到mRNA表现
用western却测不到protein的表现
如果排除掉mRNA sample被plasmid污染和antibody有问题
还会有其他原因造成这个结果吗?
p.s.表现的基因是extracellular domain,并不是全长
不过我有去确认过antibody是用这段当antigen做出来的
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.70.57
1F：→ sancra:Ctrl的情形呢? 是否其他细胞株、其他plasmid也这样? 10/15 09:37
2F：→ sancra:送进去的mRNA 有start coden吗，in vitro可以合成protein吗 10/15 09:37
3F：→ Rinehot:建议测试一下antibody 曾有坏掉然後以为没表现的经验过 10/15 13:02
4F：→ doskoi:有START CODON...我先确认一下ANTIBODY活性好了 10/15 15:34
5F：推 leoblack:那有stop codon!?in-frame?!先送sequence确定一下比较好~ 10/15 15:47
6F：→ doskoi:stop codon, in frame 都没问题...有送过定序 10/16 03:00
7F：推 zeroking0519:Kozak sequence?? 10/20 10:25
8F：推 a84539568:有确认过此序列是否有in frame吗？ 10/24 15:26