作者pent (情人去死)
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質濃度定量 for SDS-PAGE
時間Sat Oct 10 19:43:33 2009
抱歉，問個笨問題
bradford assay測濃度，BSA建standard curve
duplicate,96-well plate
sample 10ul+ 190 bradford reagent
reagent 5倍稀釋
(mg/ml)
sample OD1 OD2 average
1 1.0329 1.0275 1.0302
0.5 0.7091 0.714 0.71155
0.25 0.3947 0.439 0.41685
0.125 0.209 0.2159 0.21245
0.0625 0.0833 0.0659 0.0746
Blank 0.0034 -0.0034
100倍稀釋
sample average conc.
IP 0.0134 0.0118 0.0126 -7.136746
before 0.0326 0.035 0.0338 -5.095398
A 0.101 0.1 0.1005 1.327145
B 0.0675 0.0707 0.0691 -1.696361
趨勢線的公式：y=0.9629x-0.0835 r square>0.95
1.想請問因為我IP完後，濃度反而低於IP前，是不是我那一步錯誤，
這樣正常嗎？
2.bradford assay測的濃度可以在低嗎？我想建一條standard，濃度到0.0625mg/ml以下
，我剛抽出來的protein濃度太稀了，因為這是很重要的sample，又有點趕時間
3.超級笨問題 先將sample OD帶入趨勢線公式在乘回稀釋倍數，
還是先將OD*diluent factor?
感激不盡<(_._)>
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.60
1F：→ Anvec:關於問題2 一般認為bradford方法的線性範圍是 0.02-1.2ug/ul 10/14 00:07
2F：→ Anvec:可是就像sharkcell所說 越靠近線的兩端越不準 10/14 00:08
3F：→ Anvec:唉 我數學不好 -_- 10/14 00:11
4F：→ Anvec:偷用莊老師的 pdf :D 建議是 0.01-0.05mg 10/14 00:31
5F：→ Anvec:我第一個講的是 bio-rad 改良的 kit 0.2-0.9 ug/ul 10/14 00:32