作者pent (情人去死)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质浓度定量 for SDS-PAGE
时间Sat Oct 10 19:43:33 2009
抱歉，问个笨问题
bradford assay测浓度，BSA建standard curve
duplicate,96-well plate
sample 10ul+ 190 bradford reagent
reagent 5倍稀释
(mg/ml)
sample OD1 OD2 average
1 1.0329 1.0275 1.0302
0.5 0.7091 0.714 0.71155
0.25 0.3947 0.439 0.41685
0.125 0.209 0.2159 0.21245
0.0625 0.0833 0.0659 0.0746
Blank 0.0034 -0.0034
100倍稀释
sample average conc.
IP 0.0134 0.0118 0.0126 -7.136746
before 0.0326 0.035 0.0338 -5.095398
A 0.101 0.1 0.1005 1.327145
B 0.0675 0.0707 0.0691 -1.696361
趋势线的公式：y=0.9629x-0.0835 r square>0.95
1.想请问因为我IP完後，浓度反而低於IP前，是不是我那一步错误，
这样正常吗？
2.bradford assay测的浓度可以在低吗？我想建一条standard，浓度到0.0625mg/ml以下
，我刚抽出来的protein浓度太稀了，因为这是很重要的sample，又有点赶时间
3.超级笨问题 先将sample OD带入趋势线公式在乘回稀释倍数，
还是先将OD*diluent factor?
感激不尽<(_._)>
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.60
1F：→ Anvec:关於问题2 一般认为bradford方法的线性范围是 0.02-1.2ug/ul 10/14 00:07
2F：→ Anvec:可是就像sharkcell所说 越靠近线的两端越不准 10/14 00:08
3F：→ Anvec:唉 我数学不好 -_- 10/14 00:11
4F：→ Anvec:偷用庄老师的 pdf :D 建议是 0.01-0.05mg 10/14 00:31
5F：→ Anvec:我第一个讲的是 bio-rad 改良的 kit 0.2-0.9 ug/ul 10/14 00:32