作者icome (木村阿宅)
看板Biotech
標題[求救] 請問有denature已轉印蛋白的方法嗎?
時間Fri Oct 2 11:21:42 2009
non-boiled and non-reduced proteins已transfer到NC membrane上，
請問是否有辦法再將它denature?
原因如下:
我的target protein必須要在沒煮過的狀態下才能被抗體偵測到，
可是做internal control的anti-beta-actin抗體要煮過才能認得比較好；
有辦法在我偵測完target protein之後，再把membrane上的蛋白denature，
然後再去偵測actin嗎?
我之前試過的方法:
(1)把membrane拿去煮5分鐘，結果訊號反而更弱...可能太劇烈蛋白掉下來了。
(2)使用高濃度anti-actin抗體去認未煮過的蛋白，結果常會出現訊號時大時小
(煮過後的sample未有此情形)
不知道板上高人有什麼經驗或方法可以解決...
不然只好換一支internal control了...
感謝!
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◆ From: 140.112.121.97
1F：推 Rarelay:那SDS轉印後用urea renature呢？ 10/02 11:26
2F：→ icome:回樓上 我還沒試過 請問是用6M urea溶在TBST去wash嗎 10/02 11:28
3F：→ turtle24:同樣的sample分兩片跑 一片denature一片不煮? 10/02 12:01
4F：推 chvkimo:想法 同樓上 10/03 22:46
5F：推 sharkcell:6M urea PBST washing ~30mins , I did it. 10/04 21:52
6F：→ icome:恩 我來試試看urea 10/05 11:19