作者icome (木村阿宅)
看板Biotech
标题[求救] 请问有denature已转印蛋白的方法吗?
时间Fri Oct 2 11:21:42 2009
non-boiled and non-reduced proteins已transfer到NC membrane上，
请问是否有办法再将它denature?
原因如下:
我的target protein必须要在没煮过的状态下才能被抗体侦测到，
可是做internal control的anti-beta-actin抗体要煮过才能认得比较好；
有办法在我侦测完target protein之後，再把membrane上的蛋白denature，
然後再去侦测actin吗?
我之前试过的方法:
(1)把membrane拿去煮5分钟，结果讯号反而更弱...可能太剧烈蛋白掉下来了。
(2)使用高浓度anti-actin抗体去认未煮过的蛋白，结果常会出现讯号时大时小
(煮过後的sample未有此情形)
不知道板上高人有什麽经验或方法可以解决...
不然只好换一支internal control了...
感谢!
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◆ From: 140.112.121.97
1F：推 Rarelay:那SDS转印後用urea renature呢？ 10/02 11:26
2F：→ icome:回楼上 我还没试过 请问是用6M urea溶在TBST去wash吗 10/02 11:28
3F：→ turtle24:同样的sample分两片跑 一片denature一片不煮? 10/02 12:01
4F：推 chvkimo:想法 同楼上 10/03 22:46
5F：推 sharkcell:6M urea PBST washing ~30mins , I did it. 10/04 21:52
6F：→ icome:恩 我来试试看urea 10/05 11:19