作者catalyst (abc)
看板Biotech
標題[求救] RNA isolation 加錯東西
時間Wed Sep 30 05:21:05 2009
我是用Trizol抽的 先說一下步驟
1ml Trizol到細胞pellet
200ml Chloroform
取上清液
加等體積isopropanal
離心留下pellet
酒精wash
回溶到50ul DEPC water+ DNase I+ RNase out incubation 30 mins
--------------------------------------------------------------------------
以上都沒有問題，接下來問題來了
一般接下來的步驟是+150 DEPC water, 然後加
Phenol/ Chloroform,/ iso amy alcohon (25:24:1) 200ul
可是我一時手誤，把本來該加的DEPC water加成了isopropanal
請問之後的離心，還是一樣會被分離在上層嗎？
(因為一般isopropanal是沈澱用的，可是p/c/i是將RNA 分離在上層上清液的）
如此一來，產物到底會在下層還是上層？
有請高手幫忙解答一下，謝謝了~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 77.8.162.157
1F：→ catalyst:自己回答，後來我再多加入cloroform, 然後照去離心 10/01 02:23
2F：→ catalyst:後續步驟照常，也有抽出來, quality 還ok 10/01 02:23
3F：→ raxjimmy:這個步驟很特別呢@@ 先沉澱處理RNase再分離 10/02 02:12
4F：推 raxjimmy:請問你萃取的是什麼細胞 這樣處理有什麼特殊目的嗎? 10/02 02:13
5F：推 jokefunny:+DNase因為他要做RT 所以把裡面DNA去除 這樣比較純吧? 10/02 12:27
6F：→ jokefunny:然後RNase out 是怕他的RNA被分解 樓上是問這嘛 10/02 12:28
7F：推 raxjimmy:我是好奇為什麼會分兩次純化 10/02 14:14
8F：→ catalyst:因為要跑QPCR所以希望純度好一點，又沒有DNA 污染 10/03 00:18
9F：→ catalyst:近來前實驗室就用這個protocol, 只是很費時倒是 10/03 00:19
10F：→ catalyst:我是用Microglia, 不過後來產量都好少阿~~ 10/03 00:21
11F：推 raxjimmy:我懂了 謝謝^^ 10/05 18:27