作者catalyst (abc)
看板Biotech
标题[求救] RNA isolation 加错东西
时间Wed Sep 30 05:21:05 2009
我是用Trizol抽的 先说一下步骤
1ml Trizol到细胞pellet
200ml Chloroform
取上清液
加等体积isopropanal
离心留下pellet
酒精wash
回溶到50ul DEPC water+ DNase I+ RNase out incubation 30 mins
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以上都没有问题，接下来问题来了
一般接下来的步骤是+150 DEPC water, 然後加
Phenol/ Chloroform,/ iso amy alcohon (25:24:1) 200ul
可是我一时手误，把本来该加的DEPC water加成了isopropanal
请问之後的离心，还是一样会被分离在上层吗？
(因为一般isopropanal是沈淀用的，可是p/c/i是将RNA 分离在上层上清液的）
如此一来，产物到底会在下层还是上层？
有请高手帮忙解答一下，谢谢了~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 77.8.162.157
1F：→ catalyst:自己回答，後来我再多加入cloroform, 然後照去离心 10/01 02:23
2F：→ catalyst:後续步骤照常，也有抽出来, quality 还ok 10/01 02:23
3F：→ raxjimmy:这个步骤很特别呢@@ 先沉淀处理RNase再分离 10/02 02:12
4F：推 raxjimmy:请问你萃取的是什麽细胞 这样处理有什麽特殊目的吗? 10/02 02:13
5F：推 jokefunny:+DNase因为他要做RT 所以把里面DNA去除 这样比较纯吧? 10/02 12:27
6F：→ jokefunny:然後RNase out 是怕他的RNA被分解 楼上是问这嘛 10/02 12:28
7F：推 raxjimmy:我是好奇为什麽会分两次纯化 10/02 14:14
8F：→ catalyst:因为要跑QPCR所以希望纯度好一点，又没有DNA 污染 10/03 00:18
9F：→ catalyst:近来前实验室就用这个protocol, 只是很费时倒是 10/03 00:19
10F：→ catalyst:我是用Microglia, 不过後来产量都好少阿~~ 10/03 00:21
11F：推 raxjimmy:我懂了 谢谢^^ 10/05 18:27