作者lovelara (我要變直哉)
看板Biotech
標題[求救] His tag 的純化
時間Sun Sep 27 02:04:15 2009
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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大家好
小弟現在正在做 His tag的純化
目前實驗室用的 resign 是 GE的 STREAMLINE Chelating
需要自己binding上 Ni離子
看過paper 有寫到說是用0.2M的 NiSO4 溶液
但是 不確定是不是在open column的情況下做??
另外 若是在這樣的情況之下 如何確認binding 上Ni的數量呢??
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.43.9.71
1F：推 wensing:我的做法是：將resin注入column中，以大量水去清洗 09/27 13:48
2F：→ wensing:加是2~3倍體積的NiSO4，再以大量ddH2O，注意一下resin的 09/27 13:49
3F：→ wensing:顏色變化，然後再用平衡用的buffer 來平衡，即可使用 09/27 13:50
4F：→ wensing:以上，提供你參考，其他方式，可以參考S或Q牌的 09/27 13:52
5F：→ wensing:我記得產品書上好像有寫每ml的resin可以鍵結多少量的Ni 09/27 13:53
6F：→ wensing:若沒有的話，直接問他們的產品專員，請他們寄給你 09/27 13:54
7F：→ wensing:我記得...那專員(女) 聲音....不錯！ 09/27 13:55
8F：→ lovelara:是直接用重力的方法嗎?? 可是實際上接上去的Ni會不一樣 09/27 14:12
9F：→ lovelara:所以 想計算實際接上Ni的濃度 09/27 14:14
10F：推 wensing:我都是用重力純化 09/27 14:30
11F：→ turtle24:滴一些NaOH到廢液裡面 Ni好像會沉澱出來..烘乾稱重看看 09/27 14:59
12F：推 aggaci:怎麼不用幫浦.....重力純化好浪費時間 09/27 15:14
13F：→ lovelara:我是想用AKTA那台機器 可是NiSO4好像不能通那台機器 09/27 16:07
14F：推 wensing:FPLC？！ 科科，我們家沒有這機器 09/27 23:44
15F：推 statan:AKTA有內建His-tag purification program，其中有charge Ni 09/28 16:14
16F：→ statan:的步驟，是要通NiSO4 09/28 16:14
17F：推 statan:不過所有要上AKTA的buffer要通0.22um filter 09/28 16:16
18F：推 vixen:為何要0.22um? 0.45的或0.90的不行嗎? 09/29 14:46
19F：推 jason0919:.22可以濾菌 所以manual才會建議這樣 不過sample過.22不 09/29 23:32
20F：→ jason0919:好通的話.45也可以 太大會損壞機器 09/29 23:32
21F：→ jason0919:至於重力純化 其實可以接上一根syringe 有螺紋的... 09/29 23:34
22F：→ jason0919:慢慢通 大約數秒一滴的速率就夠了 09/29 23:35