作者lovelara (我要变直哉)
看板Biotech
标题[求救] His tag 的纯化
时间Sun Sep 27 02:04:15 2009
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
大家好
小弟现在正在做 His tag的纯化
目前实验室用的 resign 是 GE的 STREAMLINE Chelating
需要自己binding上 Ni离子
看过paper 有写到说是用0.2M的 NiSO4 溶液
但是 不确定是不是在open column的情况下做??
另外 若是在这样的情况之下 如何确认binding 上Ni的数量呢??
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.43.9.71
1F：推 wensing:我的做法是：将resin注入column中，以大量水去清洗 09/27 13:48
2F：→ wensing:加是2~3倍体积的NiSO4，再以大量ddH2O，注意一下resin的 09/27 13:49
3F：→ wensing:颜色变化，然後再用平衡用的buffer 来平衡，即可使用 09/27 13:50
4F：→ wensing:以上，提供你参考，其他方式，可以参考S或Q牌的 09/27 13:52
5F：→ wensing:我记得产品书上好像有写每ml的resin可以键结多少量的Ni 09/27 13:53
6F：→ wensing:若没有的话，直接问他们的产品专员，请他们寄给你 09/27 13:54
7F：→ wensing:我记得...那专员(女) 声音....不错！ 09/27 13:55
8F：→ lovelara:是直接用重力的方法吗?? 可是实际上接上去的Ni会不一样 09/27 14:12
9F：→ lovelara:所以 想计算实际接上Ni的浓度 09/27 14:14
10F：推 wensing:我都是用重力纯化 09/27 14:30
11F：→ turtle24:滴一些NaOH到废液里面 Ni好像会沉淀出来..烘乾称重看看 09/27 14:59
12F：推 aggaci:怎麽不用帮浦.....重力纯化好浪费时间 09/27 15:14
13F：→ lovelara:我是想用AKTA那台机器 可是NiSO4好像不能通那台机器 09/27 16:07
14F：推 wensing:FPLC？！ 科科，我们家没有这机器 09/27 23:44
15F：推 statan:AKTA有内建His-tag purification program，其中有charge Ni 09/28 16:14
16F：→ statan:的步骤，是要通NiSO4 09/28 16:14
17F：推 statan:不过所有要上AKTA的buffer要通0.22um filter 09/28 16:16
18F：推 vixen:为何要0.22um? 0.45的或0.90的不行吗? 09/29 14:46
19F：推 jason0919:.22可以滤菌 所以manual才会建议这样 不过sample过.22不 09/29 23:32
20F：→ jason0919:好通的话.45也可以 太大会损坏机器 09/29 23:32
21F：→ jason0919:至於重力纯化 其实可以接上一根syringe 有螺纹的... 09/29 23:34
22F：→ jason0919:慢慢通 大约数秒一滴的速率就够了 09/29 23:35