作者terrylin17 (快意)
看板Biotech
標題[求救] SiRNA transfection knockdown target gene的技術
時間Fri Sep 18 15:26:12 2009
請問各位大大
我目前實驗主軸是 SiRNA的transdection 作 基因knockdown的實驗
使用的輔助劑是用 invitrogen買的 lipofatamine2000
條件基本上是抓
5 ul lipo + 2.5 ul SiRNA
transfection 6hr後再加入30%FBS medium
我是做cell culture 的 SiRNA knockdown
但是knockdown的效果並不是很穩定.....
但是我又不能再換其他種的transfect方法
請問有人也有做過類似的實驗嗎 ?
請教各位了 謝謝
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◆ From: 211.76.175.170
1F：推 vancent:SEEDING細胞數量?VECTOR選定?PROMOTER選定?\ 09/18 16:05
2F：→ terrylin17:seeding數量約70~80% 09/18 16:44
3F：→ terrylin17:transfection時 就加入 lipo and SiRNA 而以ㄋ 09/18 16:45
4F：→ terrylin17:沒有放 promoter 09/18 16:45
5F：推 Fourfish:細胞株?siRNA量?所謂的不穩定是...cell死很多?時好時壞? 09/18 17:20
6F：推 mandible:30%FBS好像太多了吧!他應該不是用vector或是promoter系統 09/18 18:11
7F：推 aceliang:沒有放promoter???不穩定是用啥判斷？WB?PCR? 09/18 19:18
8F：推 ooooh:沒有需要promoter啊 他是用siRNA不是shRNAi 09/18 21:19
9F：→ ooooh:你是transfect什麼樣的細胞會有影響 09/18 21:19
10F：→ fungihsu:經驗發現transfection 6hr換serum-free media,knockdown 09/18 22:39
11F：→ fungihsu:效果最穩定. 還有會連續做兩次siRNA transfection, 09/18 22:41
12F：→ fungihsu:中間隔兩天 09/18 22:42