作者terrylin17 (快意)
看板Biotech
标题[求救] SiRNA transfection knockdown target gene的技术
时间Fri Sep 18 15:26:12 2009
请问各位大大
我目前实验主轴是 SiRNA的transdection 作 基因knockdown的实验
使用的辅助剂是用 invitrogen买的 lipofatamine2000
条件基本上是抓
5 ul lipo + 2.5 ul SiRNA
transfection 6hr後再加入30%FBS medium
我是做cell culture 的 SiRNA knockdown
但是knockdown的效果并不是很稳定.....
但是我又不能再换其他种的transfect方法
请问有人也有做过类似的实验吗 ?
请教各位了 谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.76.175.170
1F：推 vancent:SEEDING细胞数量?VECTOR选定?PROMOTER选定?\ 09/18 16:05
2F：→ terrylin17:seeding数量约70~80% 09/18 16:44
3F：→ terrylin17:transfection时 就加入 lipo and SiRNA 而以ㄋ 09/18 16:45
4F：→ terrylin17:没有放 promoter 09/18 16:45
5F：推 Fourfish:细胞株?siRNA量?所谓的不稳定是...cell死很多?时好时坏? 09/18 17:20
6F：推 mandible:30%FBS好像太多了吧!他应该不是用vector或是promoter系统 09/18 18:11
7F：推 aceliang:没有放promoter???不稳定是用啥判断？WB?PCR? 09/18 19:18
8F：推 ooooh:没有需要promoter啊 他是用siRNA不是shRNAi 09/18 21:19
9F：→ ooooh:你是transfect什麽样的细胞会有影响 09/18 21:19
10F：→ fungihsu:经验发现transfection 6hr换serum-free media,knockdown 09/18 22:39
11F：→ fungihsu:效果最稳定. 还有会连续做两次siRNA transfection, 09/18 22:41
12F：→ fungihsu:中间隔两天 09/18 22:42