作者hoop0227 (阿啾)
看板Biotech
標題[求救] 請問K562細胞和羊水幹細胞哪個大?!
時間Wed Sep 16 21:07:11 2009
不好意思我想請問一下K562和羊水幹細胞哪個大呢?!
因為我最近在萃取PROTEIN
可是一直都做得不是很好,
到最後一步離心完整個是很清澈,
然後去測OD值的結果也超低的!!
所以我在想我是不是因為細胞太小雖然細胞數足夠(6*10^6)
但因為細胞小所以蛋白質少!!
以下是我的步驟!!
1.用 cold d-PBS wash 兩次4度C 1500rpm 5min
2配lysing buffer + protease inhibitor
3.cell pellet vortex
4.加50ul的 2.
5.劇烈vortex 之後冰上作用十分鐘
6.離心10000 rpm 2min 4度C
7.取上清液到新epp
8.存20度C
麻煩幫我鑑定一下我到底哪裡出問題!!
拜託大家了>"<!!
因為我有時間上的限制!!
謝謝....
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.167.138.238
1F：推 ranilla:細胞過多，導致lysis br.不夠力 09/16 21:22
2F：→ hoop0227:不好意思,請問所以是lysing buffer加不夠的關係嗎?!?!?! 09/16 22:08
3F：→ ranilla:6*10^6的細胞數加300~500ul的lysis br.應該沒問題 09/17 06:42
4F：→ ranilla:因為每種細胞的的細胞膜特性不同，我建議你可以6*10^6分成 09/17 06:48
5F：→ ranilla:六份，分別加入50,100,150,200,250,300ul的lysis br.看哪 09/17 06:50
6F：→ ranilla:一比例所得到的total protein量最多 09/17 06:51
7F：→ hoop0227:還有不好意思我再請教一個問題.. 09/17 08:59
8F：→ hoop0227:lysis buffer可以用lysing buffer代替嗎?!我學長說可以.. 09/17 09:00
9F：→ hoop0227:可是我看成分差很多耶!!!!!!!! 09/17 09:00
10F：→ ranilla:我個人認為溶細胞取決於detegent種類（NP40, Triton or.） 09/17 14:28
11F：→ ranilla:pH值，高等低張溶液，其他就隨自己實驗調整，如proteinase 09/17 14:30
12F：→ ranilla:inhibitor，phosphatase inhibitor等，只要做的出來，就是 09/17 14:31
13F：→ ranilla:好br. 09/17 14:31
14F：→ hoop0227:好的..謝謝你我明天再取多一點來測試看看各不同量的lysin 09/17 15:42
15F：→ hoop0227:g buffer!!今天就用昨天用的來測OD吧!!希望有用! 09/17 15:42
16F：推 leoblack:lysis buf跟lysing buf有什麼不一樣嗎!?講法沒固定吧 09/17 21:15