作者hoop0227 (阿啾)
看板Biotech
标题[求救] 请问K562细胞和羊水干细胞哪个大?!
时间Wed Sep 16 21:07:11 2009
不好意思我想请问一下K562和羊水干细胞哪个大呢?!
因为我最近在萃取PROTEIN
可是一直都做得不是很好,
到最後一步离心完整个是很清澈,
然後去测OD值的结果也超低的!!
所以我在想我是不是因为细胞太小虽然细胞数足够(6*10^6)
但因为细胞小所以蛋白质少!!
以下是我的步骤!!
1.用 cold d-PBS wash 两次4度C 1500rpm 5min
2配lysing buffer + protease inhibitor
3.cell pellet vortex
4.加50ul的 2.
5.剧烈vortex 之後冰上作用十分钟
6.离心10000 rpm 2min 4度C
7.取上清液到新epp
8.存20度C
麻烦帮我监定一下我到底哪里出问题!!
拜托大家了>"<!!
因为我有时间上的限制!!
谢谢....
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.167.138.238
1F：推 ranilla:细胞过多，导致lysis br.不够力 09/16 21:22
2F：→ hoop0227:不好意思,请问所以是lysing buffer加不够的关系吗?!?!?! 09/16 22:08
3F：→ ranilla:6*10^6的细胞数加300~500ul的lysis br.应该没问题 09/17 06:42
4F：→ ranilla:因为每种细胞的的细胞膜特性不同，我建议你可以6*10^6分成 09/17 06:48
5F：→ ranilla:六份，分别加入50,100,150,200,250,300ul的lysis br.看哪 09/17 06:50
6F：→ ranilla:一比例所得到的total protein量最多 09/17 06:51
7F：→ hoop0227:还有不好意思我再请教一个问题.. 09/17 08:59
8F：→ hoop0227:lysis buffer可以用lysing buffer代替吗?!我学长说可以.. 09/17 09:00
9F：→ hoop0227:可是我看成分差很多耶!!!!!!!! 09/17 09:00
10F：→ ranilla:我个人认为溶细胞取决於detegent种类（NP40, Triton or.） 09/17 14:28
11F：→ ranilla:pH值，高等低张溶液，其他就随自己实验调整，如proteinase 09/17 14:30
12F：→ ranilla:inhibitor，phosphatase inhibitor等，只要做的出来，就是 09/17 14:31
13F：→ ranilla:好br. 09/17 14:31
14F：→ hoop0227:好的..谢谢你我明天再取多一点来测试看看各不同量的lysin 09/17 15:42
15F：→ hoop0227:g buffer!!今天就用昨天用的来测OD吧!!希望有用! 09/17 15:42
16F：推 leoblack:lysis buf跟lysing buf有什麽不一样吗!?讲法没固定吧 09/17 21:15