作者pingagaga (pingagaga)
看板Biotech
標題[討論] phosphoprotein的western blotting
時間Tue Sep 15 16:48:28 2009
之前在做phosphoprotein的western
就有比較了用BSA跟Milk的差別
用BSA的那一組 用的濃度都是1%BSA in TBST
而用Milk的那一組 blocking是用5% milk 1抗是用o.1%BSA in TBST 2抗則用2.5%Milk
壓片出來的結果 是BSA那一組比較好
而用MILK的那一組 protein卻幾乎沒有 很白(壓了20min)
之前都是聽說用milk是會造成high background
可是我的卻是很乾淨 壓不到幾個band
在這裡想請問大家~~
milk除了會造成high background之外 是否會將phosphoprotein degrade呢?
這一點我找了很久都不知道該怎嚜解釋.....請大家幫幫忙囉~甘溫^^
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◆ From: 202.144.214.74
1F：推 vancent:不會~我壓ERK那些也是用MILK~但聽說有沒有加PHOSPHATASE 09/15 18:47
2F：→ vancent:INHIBITOR有差~但我也都沒加@"@ 09/15 18:47
3F：推 chungpei:Milk內富含highly phosphorylated的乳鐵蛋白, 所以你用 09/16 13:56
4F：→ chungpei:milk等於蓋了一層充滿phosphorylation signal上去, 會有 09/16 13:57
5F：→ chungpei:你的蛋白被degraded的感覺 09/16 13:58
6F：推 reinherd:我們實驗室的western只要看phosphorylation就一定不用牛 09/25 04:38
7F：→ reinherd:奶來block 並且一定會加phosphotase inhibitor 09/25 04:39