作者pingagaga (pingagaga)
看板Biotech
标题[讨论] phosphoprotein的western blotting
时间Tue Sep 15 16:48:28 2009
之前在做phosphoprotein的western
就有比较了用BSA跟Milk的差别
用BSA的那一组 用的浓度都是1%BSA in TBST
而用Milk的那一组 blocking是用5% milk 1抗是用o.1%BSA in TBST 2抗则用2.5%Milk
压片出来的结果 是BSA那一组比较好
而用MILK的那一组 protein却几乎没有 很白(压了20min)
之前都是听说用milk是会造成high background
可是我的却是很乾净 压不到几个band
在这里想请问大家~~
milk除了会造成high background之外 是否会将phosphoprotein degrade呢?
这一点我找了很久都不知道该怎嚜解释.....请大家帮帮忙罗~甘温^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 202.144.214.74
1F：推 vancent:不会~我压ERK那些也是用MILK~但听说有没有加PHOSPHATASE 09/15 18:47
2F：→ vancent:INHIBITOR有差~但我也都没加@"@ 09/15 18:47
3F：推 chungpei:Milk内富含highly phosphorylated的乳铁蛋白, 所以你用 09/16 13:56
4F：→ chungpei:milk等於盖了一层充满phosphorylation signal上去, 会有 09/16 13:57
5F：→ chungpei:你的蛋白被degraded的感觉 09/16 13:58
6F：推 reinherd:我们实验室的western只要看phosphorylation就一定不用牛 09/25 04:38
7F：→ reinherd:奶来block 并且一定会加phosphotase inhibitor 09/25 04:39