作者pent (情人去死)
看板Biotech
標題[求救] 抽大量plasmid，isopropanol沈澱後看不到pellet
時間Fri Sep 11 18:56:59 2009
我用的是qiagent endofree maxi kit
搖200ml的菌量，離心後，把全部的菌量用10ml
的p1混合成一管，完成依照他的protocol
但是最後，用isopropanol沈澱後，一直都看不到pellet
第一次測出來，濃度才9ng/ul，根本是沒有抽到
做了兩次，都是這樣的結果Q.Q
請問該怎樣確認到底是中間哪步驟出了問題?
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.60
1F：推 turtle24:同樣的plasmid 抽miniprep大概有多少量? 09/11 19:03
2F：推 driws:用2YT養看看 check copy number 增加p1的量 09/11 19:10
3F：推 ozzy0918:抽大量的話 打破細菌那步很重要 確定有打到變豆漿嗎? 09/11 21:14
4F：推 kemp6611:抽大量的話~~~還是用傳統法吧!! 09/11 22:10
5F：推 tsubasawolfy:菌太多P1沒均勻打散後面的P2無法完全溶解.. 09/11 22:30
6F：→ pent:mini大概可以抽到5ug/50ul，我猜是不是加isopropanol後，就 09/12 08:15
7F：→ pent:接離心，沒有在室溫下等個十分鐘，這有關西嗎？ 09/12 08:15
8F：推 conective:所以protocol上寫加了isopropanol後直接離心嗎？ 09/12 09:43
9F：→ pent:沒寫，沒有特別註明 09/12 16:51
10F：→ pent:這邊的原因，後來我發現，P2下去後，藍藍的部份呈現局部一顆 09/29 22:02
11F：→ pent:顆的，後來我加P2後，會一直搖一直搖，到非常均勻為止 09/29 22:03