作者pent (情人去死)
看板Biotech
标题[求救] 抽大量plasmid，isopropanol沈淀後看不到pellet
时间Fri Sep 11 18:56:59 2009
我用的是qiagent endofree maxi kit
摇200ml的菌量，离心後，把全部的菌量用10ml
的p1混合成一管，完成依照他的protocol
但是最後，用isopropanol沈淀後，一直都看不到pellet
第一次测出来，浓度才9ng/ul，根本是没有抽到
做了两次，都是这样的结果Q.Q
请问该怎样确认到底是中间哪步骤出了问题?
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.60
1F：推 turtle24:同样的plasmid 抽miniprep大概有多少量? 09/11 19:03
2F：推 driws:用2YT养看看 check copy number 增加p1的量 09/11 19:10
3F：推 ozzy0918:抽大量的话 打破细菌那步很重要 确定有打到变豆浆吗? 09/11 21:14
4F：推 kemp6611:抽大量的话~~~还是用传统法吧!! 09/11 22:10
5F：推 tsubasawolfy:菌太多P1没均匀打散後面的P2无法完全溶解.. 09/11 22:30
6F：→ pent:mini大概可以抽到5ug/50ul，我猜是不是加isopropanol後，就 09/12 08:15
7F：→ pent:接离心，没有在室温下等个十分钟，这有关西吗？ 09/12 08:15
8F：推 conective:所以protocol上写加了isopropanol後直接离心吗？ 09/12 09:43
9F：→ pent:没写，没有特别注明 09/12 16:51
10F：→ pent:这边的原因，後来我发现，P2下去後，蓝蓝的部份呈现局部一颗 09/29 22:02
11F：→ pent:颗的，後来我加P2後，会一直摇一直摇，到非常均匀为止 09/29 22:03