作者driws (自由 呼吸 存在)
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質沉澱
時間Fri Sep 11 16:57:47 2009
目前採用硫酸銨來做蛋白沉澱
蛋白質原先存在一般的lysis buffer中
加入硫酸銨(80%)
vortex 15 min 離心12000 rpm 30 min 4度下
但是無法順利取得沉澱
蛋白質全都浮再上面...
離更久也是
請問有人知道如何解決嗎?
感謝~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.54.2
1F：推 turtle24:把硫酸銨慢慢滴進去一邊stir(4度C)看看 09/11 17:11
2F：推 inchew:硫酸銨要邊stir邊慢慢加入 注意局部濃度不要過高 09/12 02:59
3F：→ inchew:如果buffer表面有泡狀漂浮物,表示硫酸胺加太快讓蛋白變性了 09/12 03:00
4F：→ nyctifalcon:剛開始做的話，建議依照飽和濃度來分段加。 09/12 03:20
5F：推 kirby0415:4度C邊stir邊慢慢加入+1,我加完還會stir個2hrs,之後離心 09/12 12:41
6F：→ kirby0415:19000rpm,30mins 09/12 12:41
7F：→ kirby0415:vortex不知道好不好耶,stir可能比較好吧!! 09/12 12:42
8F：推 raxjimmy:不要依賴RPM, xg比較準確 09/13 01:26
9F：→ sharkcell:加完硫酸銨有白色固體出現嗎？感覺懸浮物不是蛋白質的說 09/14 02:18