作者driws (自由 呼吸 存在)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质沉淀
时间Fri Sep 11 16:57:47 2009
目前采用硫酸铵来做蛋白沉淀
蛋白质原先存在一般的lysis buffer中
加入硫酸铵(80%)
vortex 15 min 离心12000 rpm 30 min 4度下
但是无法顺利取得沉淀
蛋白质全都浮再上面...
离更久也是
请问有人知道如何解决吗?
感谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.54.2
1F：推 turtle24:把硫酸铵慢慢滴进去一边stir(4度C)看看 09/11 17:11
2F：推 inchew:硫酸铵要边stir边慢慢加入 注意局部浓度不要过高 09/12 02:59
3F：→ inchew:如果buffer表面有泡状漂浮物,表示硫酸胺加太快让蛋白变性了 09/12 03:00
4F：→ nyctifalcon:刚开始做的话，建议依照饱和浓度来分段加。 09/12 03:20
5F：推 kirby0415:4度C边stir边慢慢加入+1,我加完还会stir个2hrs,之後离心 09/12 12:41
6F：→ kirby0415:19000rpm,30mins 09/12 12:41
7F：→ kirby0415:vortex不知道好不好耶,stir可能比较好吧!! 09/12 12:42
8F：推 raxjimmy:不要依赖RPM, xg比较准确 09/13 01:26
9F：→ sharkcell:加完硫酸铵有白色固体出现吗？感觉悬浮物不是蛋白质的说 09/14 02:18