作者toiot (花套牙)
看板Biotech
標題[求救] 為什麼送定序回來，F跟R還是不一樣?
時間Wed Sep 9 17:49:10 2009
我想問的是，
把同一支菌(從single colony養出來的三區)送insert的定序，
理論上foward和reverse只是從double strand的兩端讀過去和讀回來而已不是嗎?
可是為什麼allign foward sequence和reverse sequence的時候，
兩者還是有些微差異呢?
反請各位大大位我解惑，謝謝ˊˋ
--
寬恕是病人與上帝的事，我的工作是安排他們見面
By 波波
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 211.76.93.122
1F：推 howeichu:"些微"是什麼??是不是太長了?所以沒有overlap 09/09 18:29
有，大部分都overlap，
像這樣
forward ____________________________________
reverse ______________________________________
↑
可是中間的部份有的就有一兩個(單獨的)對不起來，
(比如像箭頭處)
可是蛋白質要轉譯一個都不能不一樣阿ˊˋ
為什麼會這樣?
※ 編輯: toiot 來自: 211.76.93.122 (09/09 18:39)
2F：推 jademan:sequence error 兩端讀總會有一小部份不同 09/09 19:35
3F：推 kemp6611:要看一下定序後的圖比較準~~有時訊息太弱或重疊會"誤判"~ 09/09 20:02
4F：→ toiot:了解，謝謝～ 09/09 20:05
5F：推 captdavince:借標題請問一下..會有可能是point mutation嗎? 09/09 22:45
※ 編輯: toiot 來自: 211.76.93.122 (09/09 23:08)
6F：推 kemp6611:Taq酵素在複製DNA時有時會出錯，而造成DNA序列突變(錯誤) 09/09 23:53
7F：→ kemp6611:所以通常需要二重複到三重複的定序結果去檢視之.. 09/09 23:54
8F：→ sGoat:重新做clone,還有請愛用pfu... 09/10 08:10
9F：推 chvkimo:如果真的是point mutation ,定序回來的Forward和Reverse序 09/10 14:38
10F：→ chvkimo:列,overlap處 理應會match,只是定出的序列與wild type序列 09/10 14:40
11F：→ chvkimo:會不一樣 09/10 14:41
12F：→ chvkimo:簡單的說 若發生point mutation理應不會出現定序不match 09/10 14:42
13F：→ chvkimo:的問題 09/10 14:43