作者toiot (花套牙)
看板Biotech
标题[求救] 为什麽送定序回来，F跟R还是不一样?
时间Wed Sep 9 17:49:10 2009
我想问的是，
把同一支菌(从single colony养出来的三区)送insert的定序，
理论上foward和reverse只是从double strand的两端读过去和读回来而已不是吗?
可是为什麽allign foward sequence和reverse sequence的时候，
两者还是有些微差异呢?
反请各位大大位我解惑，谢谢ˊˋ
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宽恕是病人与上帝的事，我的工作是安排他们见面
By 波波
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.76.93.122
1F：推 howeichu:"些微"是什麽??是不是太长了?所以没有overlap 09/09 18:29
有，大部分都overlap，
像这样
forward ____________________________________
reverse ______________________________________
↑
可是中间的部份有的就有一两个(单独的)对不起来，
(比如像箭头处)
可是蛋白质要转译一个都不能不一样阿ˊˋ
为什麽会这样?
※ 编辑: toiot 来自: 211.76.93.122 (09/09 18:39)
2F：推 jademan:sequence error 两端读总会有一小部份不同 09/09 19:35
3F：推 kemp6611:要看一下定序後的图比较准~~有时讯息太弱或重叠会"误判"~ 09/09 20:02
4F：→ toiot:了解，谢谢～ 09/09 20:05
5F：推 captdavince:借标题请问一下..会有可能是point mutation吗? 09/09 22:45
※ 编辑: toiot 来自: 211.76.93.122 (09/09 23:08)
6F：推 kemp6611:Taq酵素在复制DNA时有时会出错，而造成DNA序列突变(错误) 09/09 23:53
7F：→ kemp6611:所以通常需要二重复到三重复的定序结果去检视之.. 09/09 23:54
8F：→ sGoat:重新做clone,还有请爱用pfu... 09/10 08:10
9F：推 chvkimo:如果真的是point mutation ,定序回来的Forward和Reverse序 09/10 14:38
10F：→ chvkimo:列,overlap处 理应会match,只是定出的序列与wild type序列 09/10 14:40
11F：→ chvkimo:会不一样 09/10 14:41
12F：→ chvkimo:简单的说 若发生point mutation理应不会出现定序不match 09/10 14:42
13F：→ chvkimo:的问题 09/10 14:43