作者Anneys (對的人~*)
看板Biotech
標題[求救] western blot壓collagen
時間Tue Sep 8 22:20:22 2009
最近用western blot壓cell lysate內的collagen
每well loading 30ug
同時壓tubulin當control
結果collagen 都一片空白，tubulin濃到membrane都焦黃了
我用的一抗(collagen)是用santa cruz 比例 1:200 4度C overnight
此抗體的data sheet上寫著適用WB,卻沒show出結果data
目前實驗室內沒人用此抗體作western, 所以無從比較 (此抗體是現有的)
跟santa cruz反應，它叫我用1:100 和load到60ug
對於它的建議，我實在很困惑，真的需用到1:100這麼高嗎?
load 60這個，因為收下的protein濃度約為 2ug/ul,要load到這麼多，實在load不進去
想請問，有哪裡是我沒注意到的嗎? 我真的想破頭了
感謝!
p.s.對於換另一支抗體,因為我們不是學術實驗室,沒有很肯定work的話,
比較無法要求買抗體來試,只能用現成的抗體作
--
在我對的時間遇到對的你
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.39.149.64
1F：推 liuse:啊你沒有先查previous publication 有哪隻ab可染 09/08 23:40
2F：→ liuse:然後買那隻 09/08 23:40
3F：推 reinherd:你抗體濃度高到不可思議 09/09 06:44
4F：推 mandible:聖誕老公公都建議用這麼高.. 09/09 10:22
5F：→ mandible:你是壓哪一個COLLAGEN阿..COLLAGEN有20幾種喔!! 09/09 10:23
6F：→ mandible:還有..你的細胞會表現collagen嗎?? 09/09 10:23
7F：→ mandible:這是我之前detect collagen的經驗啦!! 09/09 10:24
8F：→ malakaki:有帶positive control嗎? 09/09 10:27
9F：→ Anneys:我買sc-80760那支. cell是fibroblast 09/10 20:41
10F：推 ozzy0918:有的western的條件就是不好找阿 爬文 然後慢慢試各個可能 09/13 20:20
11F：推 aurth:抗體用的比我還高...我用1:5000 collagen I可以跑的出來 10/11 17:54
12F：→ aurth:我是用SC-59772這支的 10/11 17:55
13F：→ aurth:建議不要用Tyrspin取lysate 這種細胞容易被刮去ECM 10/11 18:01