作者Anneys (对的人~*)
看板Biotech
标题[求救] western blot压collagen
时间Tue Sep 8 22:20:22 2009
最近用western blot压cell lysate内的collagen
每well loading 30ug
同时压tubulin当control
结果collagen 都一片空白，tubulin浓到membrane都焦黄了
我用的一抗(collagen)是用santa cruz 比例 1:200 4度C overnight
此抗体的data sheet上写着适用WB,却没show出结果data
目前实验室内没人用此抗体作western, 所以无从比较 (此抗体是现有的)
跟santa cruz反应，它叫我用1:100 和load到60ug
对於它的建议，我实在很困惑，真的需用到1:100这麽高吗?
load 60这个，因为收下的protein浓度约为 2ug/ul,要load到这麽多，实在load不进去
想请问，有哪里是我没注意到的吗? 我真的想破头了
感谢!
p.s.对於换另一支抗体,因为我们不是学术实验室,没有很肯定work的话,
比较无法要求买抗体来试,只能用现成的抗体作
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在我对的时间遇到对的你
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.39.149.64
1F：推 liuse:啊你没有先查previous publication 有哪只ab可染 09/08 23:40
2F：→ liuse:然後买那只 09/08 23:40
3F：推 reinherd:你抗体浓度高到不可思议 09/09 06:44
4F：推 mandible:圣诞老公公都建议用这麽高.. 09/09 10:22
5F：→ mandible:你是压哪一个COLLAGEN阿..COLLAGEN有20几种喔!! 09/09 10:23
6F：→ mandible:还有..你的细胞会表现collagen吗?? 09/09 10:23
7F：→ mandible:这是我之前detect collagen的经验啦!! 09/09 10:24
8F：→ malakaki:有带positive control吗? 09/09 10:27
9F：→ Anneys:我买sc-80760那支. cell是fibroblast 09/10 20:41
10F：推 ozzy0918:有的western的条件就是不好找阿 爬文 然後慢慢试各个可能 09/13 20:20
11F：推 aurth:抗体用的比我还高...我用1:5000 collagen I可以跑的出来 10/11 17:54
12F：→ aurth:我是用SC-59772这支的 10/11 17:55
13F：→ aurth:建议不要用Tyrspin取lysate 这种细胞容易被刮去ECM 10/11 18:01