作者biogene (鳥蛋)
看板Biotech
標題[求救]透析&濃縮
時間Thu Sep 3 00:41:30 2009
這陣子都在將純化的GST fusion protein做透析和濃縮
elution buffer:
30mM Reduced Glutathione
100mM Tris-HCl pH=8.5
1% Triton X-100
純化完都是直接凍-80度
透析是用1x PBS 換3~4次
但是不論在濃縮或是透析都會出現蛋白質沉澱
我想請問版友們
有什麼方法可以解決
目前只有想到是否是因為濃度過高(後續實驗是比較希望能高一點)
感謝!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.227.128.239
1F：→ turtle24:透析是在冷凍前還是後? 09/03 02:14
2F：→ biogene:冷凍後 09/03 09:05
3F：→ toocool5941:protein冷凍解凍易造成變性沉澱。直接就去透析如何? 09/03 09:59
4F：推 liuse:我們也都是純化完直接透析 再看情況是否要濃縮 09/03 10:36
5F：推 olpo:有些蛋白本來就會沉澱 case by case 09/03 13:06
6F：推 wensing:我的是透析過程會有大量澱，應該是salt-in -out的問題吧？ 09/03 13:59
7F：→ sharkcell:樓上正解 09/04 02:35
8F：推 Fourfish:protein的pI跟buffer pH？ 09/04 22:58
9F：→ biogene:直接透析感覺效果不錯 那是之後都不能冷凍的意思嗎? 09/04 23:57
10F：→ biogene:請問pH和pI會如何影響呢? 謝謝:) 09/04 23:59
11F：→ Fourfish:我們protein也不敢凍 只冰4度 pH若在等電點易沈澱 09/05 00:14
12F：→ Fourfish:salt-in -out沈澱出來的protein 不是溶的回去嗎?? 09/05 00:16
13F：→ sharkcell:有些蛋白質需要有一點鹽濃度才會溶，所以透析後的鹽濃度 09/07 21:11
14F：→ sharkcell:過低，這些原本因鹽濃度高溶解的蛋白質就又析出了 09/07 21:11