作者biogene (鸟蛋)
看板Biotech
标题[求救]透析&浓缩
时间Thu Sep 3 00:41:30 2009
这阵子都在将纯化的GST fusion protein做透析和浓缩
elution buffer:
30mM Reduced Glutathione
100mM Tris-HCl pH=8.5
1% Triton X-100
纯化完都是直接冻-80度
透析是用1x PBS 换3~4次
但是不论在浓缩或是透析都会出现蛋白质沉淀
我想请问版友们
有什麽方法可以解决
目前只有想到是否是因为浓度过高(後续实验是比较希望能高一点)
感谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.227.128.239
1F：→ turtle24:透析是在冷冻前还是後? 09/03 02:14
2F：→ biogene:冷冻後 09/03 09:05
3F：→ toocool5941:protein冷冻解冻易造成变性沉淀。直接就去透析如何? 09/03 09:59
4F：推 liuse:我们也都是纯化完直接透析 再看情况是否要浓缩 09/03 10:36
5F：推 olpo:有些蛋白本来就会沉淀 case by case 09/03 13:06
6F：推 wensing:我的是透析过程会有大量淀，应该是salt-in -out的问题吧？ 09/03 13:59
7F：→ sharkcell:楼上正解 09/04 02:35
8F：推 Fourfish:protein的pI跟buffer pH？ 09/04 22:58
9F：→ biogene:直接透析感觉效果不错 那是之後都不能冷冻的意思吗? 09/04 23:57
10F：→ biogene:请问pH和pI会如何影响呢? 谢谢:) 09/04 23:59
11F：→ Fourfish:我们protein也不敢冻 只冰4度 pH若在等电点易沈淀 09/05 00:14
12F：→ Fourfish:salt-in -out沈淀出来的protein 不是溶的回去吗?? 09/05 00:16
13F：→ sharkcell:有些蛋白质需要有一点盐浓度才会溶，所以透析後的盐浓度 09/07 21:11
14F：→ sharkcell:过低，这些原本因盐浓度高溶解的蛋白质就又析出了 09/07 21:11