作者vetcarrie (期待過一天)
看板Biotech
標題[方法] 定點突變的cycle數錯了
時間Sun Aug 30 16:37:11 2009
最近我使用stratagene的Quick change site directrd mutaganesis kit
來做定點突變
裡面有建議若是single A.a change跑PCR的cycle數是16
但我很糊塗的弄成cycle數12(為point mutation的condition)
跑完PCR之後用DpnI酵素切後跑膠還是有band
於是我拿去transform 只長了一顆colony
挑起來送定序卻定不到
有可能是我PCR cycle數出錯的關係嗎
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.129
1F：推 asolitary:cycle多一點可以多長出一些colony給你選擇去定序 08/31 00:36
2F：→ asolitary:但是突變成功的機率應該跟cycle無關~~ 08/31 00:37
3F：推 reteporeh:多試幾次看看..我也曾只長一顆就挑中的記錄.. 08/31 16:14