作者vetcarrie (期待过一天)
看板Biotech
标题[方法] 定点突变的cycle数错了
时间Sun Aug 30 16:37:11 2009
最近我使用stratagene的Quick change site directrd mutaganesis kit
来做定点突变
里面有建议若是single A.a change跑PCR的cycle数是16
但我很糊涂的弄成cycle数12(为point mutation的condition)
跑完PCR之後用DpnI酵素切後跑胶还是有band
於是我拿去transform 只长了一颗colony
挑起来送定序却定不到
有可能是我PCR cycle数出错的关系吗
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.129
1F：推 asolitary:cycle多一点可以多长出一些colony给你选择去定序 08/31 00:36
2F：→ asolitary:但是突变成功的机率应该跟cycle无关~~ 08/31 00:37
3F：推 reteporeh:多试几次看看..我也曾只长一颗就挑中的记录.. 08/31 16:14