作者mini188 (迷你邀霸罷)
看板Biotech
標題[求救] PCR結果定序出來的序列不是我要的!!
時間Mon Aug 24 15:54:09 2009
各位好
我之前PCR跑出一段序列後 送去定序
我將原來primer和定序結果blast 但是沒有相似的地方
於是我將序列reverse 也不行
我又將序列 reverse & complement 也不行
用了forward 和 reverse的 primer 都沒對到
定序的PEAK很漂亮沒問題
那請問各位 為啥之前我的PCR可以做出很shape的band?
annealing temp 是60度 應該不至於會有non-specific的問題吧?
不知道是定序方面出問題還是我的PCR出問題
但若是PCR有問題 那之前跑出的band是什麼東東??
不知道大家有什麼想法?? 謝謝!
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◆ From: 203.64.247.5
1F：推 jademan:那到底整段sequence是你要的東西嗎? 08/24 15:57
2F：推 tsubasawolfy:對看看有沒有vector的sequence.... 08/24 16:28
3F：推 bider:要不要用RE check片斷大小是否正確 08/24 16:30
4F：推 kemp6611:DNA直接跑PCR，primer後面20-30bp無法定序出來~是正常的! 08/24 20:13
5F：→ kemp6611:所以做DNA比對~當然是不可能比對到primer序列... 08/24 20:14
6F：→ kemp6611:做cloning才有可能得到完整的DNA序列 08/24 20:14
7F：推 ksn:peak很漂亮 shape band,應該是PCR定序抓不到頭尾 同意樓上~ 08/25 17:50
8F：推 Fourfish:同意4樓 PCR product直接做定序 primer定不出來正常 08/25 19:58