作者mini188 (迷你邀霸罢)
看板Biotech
标题[求救] PCR结果定序出来的序列不是我要的!!
时间Mon Aug 24 15:54:09 2009
各位好
我之前PCR跑出一段序列後 送去定序
我将原来primer和定序结果blast 但是没有相似的地方
於是我将序列reverse 也不行
我又将序列 reverse & complement 也不行
用了forward 和 reverse的 primer 都没对到
定序的PEAK很漂亮没问题
那请问各位 为啥之前我的PCR可以做出很shape的band?
annealing temp 是60度 应该不至於会有non-specific的问题吧?
不知道是定序方面出问题还是我的PCR出问题
但若是PCR有问题 那之前跑出的band是什麽东东??
不知道大家有什麽想法?? 谢谢!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.5
1F：推 jademan:那到底整段sequence是你要的东西吗? 08/24 15:57
2F：推 tsubasawolfy:对看看有没有vector的sequence.... 08/24 16:28
3F：推 bider:要不要用RE check片断大小是否正确 08/24 16:30
4F：推 kemp6611:DNA直接跑PCR，primer後面20-30bp无法定序出来~是正常的! 08/24 20:13
5F：→ kemp6611:所以做DNA比对~当然是不可能比对到primer序列... 08/24 20:14
6F：→ kemp6611:做cloning才有可能得到完整的DNA序列 08/24 20:14
7F：推 ksn:peak很漂亮 shape band,应该是PCR定序抓不到头尾 同意楼上~ 08/25 17:50
8F：推 Fourfish:同意4楼 PCR product直接做定序 primer定不出来正常 08/25 19:58