作者flpic (瀨~)
看板Biotech
標題[求救] ELISA 讀值微弱
時間Wed Aug 19 20:57:11 2009
想請問版上的各位前輩，我最近開始做VEGF的測定，使用的是snadwich ELISA。
前幾次做的時候還ok，標準曲線的最高濃度(2000 pg/ml)有約0.8的ABS(說明書上約
在ABS 2~3間)，但是之後的ABS突然變很低(ABS 0.52)。
步驟順序沒錯，時間也差不多。濃度都如說明書上建議的配，Wash buffer自己配。
我懷疑會不會是PBS擺太久，但測得的pH在7.3左右。
還是Tablet PBS(第一次ELISA時配的)和自己配的差別很大?
另外想請教前輩們，PBS對於ELISA的影響會很劇烈嗎？或是有什麼是曾經遇過會
影響結果的小細節。感激不盡阿..try error已經兩個禮拜了..
註:kit是Human VEGF:DY293B (R&D)
Reagent Diluent: DY995 (R&D)
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.93.163
1F：→ runpapa0520:呈色時間要看，不是按表操課，要等到最高濃度到點， 08/20 08:35
2F：→ runpapa0520:而次高濃度還沒到頂，才終止反應 08/20 08:38
3F：→ runpapa0520:如果擺半天都很淺，就是自身操作OR試劑的問題。 08/20 08:40
4F：→ runpapa0520:試劑都是一次配完分裝-80的話，應該不會有問題。 08/20 08:43
5F：→ flpic:謝謝你的建議!! 我再去試試看 08/20 11:30
6F：推 ZUNDERTAKER:標準品也是會隨著時間degrate 可分裝冰-20 08/25 15:44
7F：→ flpic:標準品也有分裝-20 08/29 10:53