作者flpic (濑~)
看板Biotech
标题[求救] ELISA 读值微弱
时间Wed Aug 19 20:57:11 2009
想请问版上的各位前辈，我最近开始做VEGF的测定，使用的是snadwich ELISA。
前几次做的时候还ok，标准曲线的最高浓度(2000 pg/ml)有约0.8的ABS(说明书上约
在ABS 2~3间)，但是之後的ABS突然变很低(ABS 0.52)。
步骤顺序没错，时间也差不多。浓度都如说明书上建议的配，Wash buffer自己配。
我怀疑会不会是PBS摆太久，但测得的pH在7.3左右。
还是Tablet PBS(第一次ELISA时配的)和自己配的差别很大?
另外想请教前辈们，PBS对於ELISA的影响会很剧烈吗？或是有什麽是曾经遇过会
影响结果的小细节。感激不尽阿..try error已经两个礼拜了..
注:kit是Human VEGF:DY293B (R&D)
Reagent Diluent: DY995 (R&D)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.93.163
1F：→ runpapa0520:呈色时间要看，不是按表操课，要等到最高浓度到点， 08/20 08:35
2F：→ runpapa0520:而次高浓度还没到顶，才终止反应 08/20 08:38
3F：→ runpapa0520:如果摆半天都很浅，就是自身操作OR试剂的问题。 08/20 08:40
4F：→ runpapa0520:试剂都是一次配完分装-80的话，应该不会有问题。 08/20 08:43
5F：→ flpic:谢谢你的建议!! 我再去试试看 08/20 11:30
6F：推 ZUNDERTAKER:标准品也是会随着时间degrate 可分装冰-20 08/25 15:44
7F：→ flpic:标准品也有分装-20 08/29 10:53