作者eaton (哈哈)
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標題[求救] B-actin的問題
時間Mon Aug 17 23:55:36 2009
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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想要請問一下有沒有人做western blot 的membrane
壓完抗體之後，stripping 之後，再壓B-actin卻都壓不出來，
這是我最近幾次實驗發生的問題，因為之前我用一樣的stripping buffer，
都很OK，可是最近就很慘........
今天把stripping的時間降為50度西20分鐘，TEST wash之後，
再用Ponceau S染一下，結果發現membrane上面已經沒有東西了，
所以明天的B-actin可想而知應該是沒有，所以上來請教一下個位前輩，
有沒有遇過這樣的經驗，可以給我建議，謝謝大家
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◆ From: 218.173.140.92
1F：推 aceliang:PVDF還是NC?? 08/18 00:03
2F：→ eaton:PVDF 08/18 00:09
3F：推 leoblack:stripping buf是哪家的?!我都用室溫搖10~15分就夠了 08/18 01:45
4F：推 chxx:我用invitrogen的話 室溫45分鐘即可 08/18 07:01
5F：推 chvkimo:肉眼看不到 不代表冷光訊號測不到 08/18 10:43
6F：推 leoblack:Ponceau S的訊號其實很弱~還是要以ECL的為主才說得準 08/18 10:55
7F：→ gg258:50℃會不會太高了？不然就反過來做，先壓你要看的如何？ 08/18 14:44
8F：→ gg258:說錯，先壓 actin，再壓你要看的 08/18 14:45
9F：→ eaton:stripping buf是自己配的，另外今天有壓出來，所以.... 08/18 22:58
10F：→ eaton:有時候實驗真的不知道該怎麼解釋..... 08/18 22:59
11F：推 rele:牛奶新鮮嗎 08/19 00:04
12F：→ chvkimo:eaton 很冏喔~ 08/19 10:01
13F：推 xenosdk:我也是室溫15分鐘 五十度有點太高了吧.. 08/23 08:45