作者eaton (哈哈)
站内Biotech
标题[求救] B-actin的问题
时间Mon Aug 17 23:55:36 2009
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
想要请问一下有没有人做western blot 的membrane
压完抗体之後，stripping 之後，再压B-actin却都压不出来，
这是我最近几次实验发生的问题，因为之前我用一样的stripping buffer，
都很OK，可是最近就很惨........
今天把stripping的时间降为50度西20分钟，TEST wash之後，
再用Ponceau S染一下，结果发现membrane上面已经没有东西了，
所以明天的B-actin可想而知应该是没有，所以上来请教一下个位前辈，
有没有遇过这样的经验，可以给我建议，谢谢大家
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.173.140.92
1F：推 aceliang:PVDF还是NC?? 08/18 00:03
2F：→ eaton:PVDF 08/18 00:09
3F：推 leoblack:stripping buf是哪家的?!我都用室温摇10~15分就够了 08/18 01:45
4F：推 chxx:我用invitrogen的话 室温45分钟即可 08/18 07:01
5F：推 chvkimo:肉眼看不到 不代表冷光讯号测不到 08/18 10:43
6F：推 leoblack:Ponceau S的讯号其实很弱~还是要以ECL的为主才说得准 08/18 10:55
7F：→ gg258:50℃会不会太高了？不然就反过来做，先压你要看的如何？ 08/18 14:44
8F：→ gg258:说错，先压 actin，再压你要看的 08/18 14:45
9F：→ eaton:stripping buf是自己配的，另外今天有压出来，所以.... 08/18 22:58
10F：→ eaton:有时候实验真的不知道该怎麽解释..... 08/18 22:59
11F：推 rele:牛奶新鲜吗 08/19 00:04
12F：→ chvkimo:eaton 很冏喔~ 08/19 10:01
13F：推 xenosdk:我也是室温15分钟 五十度有点太高了吧.. 08/23 08:45