作者fc01 ()
看板Biotech
標題[求救]hot start的taq是否能改善smear的情況?
時間Mon Aug 17 21:33:54 2009
目前在測試多組primer,因為要做多引子PCR,所以預設的條件都差不多
鍊合溫度根據計算的都大約在55~58度,所以我試著去拉54~60度的溫度梯度
而Mg2+的濃度我試過1.5mM;2.0mM;2.5mM;3.0mM
結果都一樣,有少數幾組可以做出single band,剩下的都smear的一蹋糊塗
而且是smear到在膠片下方沒看到primer的殘留,只看到膠片中間一片閃亮亮
DNA的用量目前大約2ng/15ul
總之目前打算再try primer濃度
因為目前使用的PCR耗材是從冰箱裡挖出來的
(我已經到職要來做實驗了,但是前任沒來跟我交接
不得已只好在冰箱裡東挖西挖挖出來上面寫taq的東西,
我查上面的編號似乎是伯昂的產品,然後什麼時候買的和說明書通通沒看到)
我主要想問的是有人遇過非常嚴重的smear靠著換hot start taq而解決的嗎
還有就是大家try一組新的primer大約會try多久
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.160.249.159
1F：推 pp33:is that tag Super-therm Gold? if it is, it might solve 08/18 00:06
2F：→ pp33:your problem since this tag is the one I have been using 08/18 00:07
3F：→ pp33:for multiplex PCR assays for years! It works fine to me! 08/18 00:08
4F：→ ookubo:你那罐taq上頭寫得名稱是啥？還有請問一下，你用多少量？ 08/18 08:34
5F：→ fc01:寫cat. JMR-801/420,我用量是0.075ul/15ul,以5U/ul來算大約是 08/18 20:08
6F：→ fc01:0.375U/15ul 08/18 20:08