作者fc01 ()
看板Biotech
标题[求救]hot start的taq是否能改善smear的情况?
时间Mon Aug 17 21:33:54 2009
目前在测试多组primer,因为要做多引子PCR,所以预设的条件都差不多
链合温度根据计算的都大约在55~58度,所以我试着去拉54~60度的温度梯度
而Mg2+的浓度我试过1.5mM;2.0mM;2.5mM;3.0mM
结果都一样,有少数几组可以做出single band,剩下的都smear的一蹋糊涂
而且是smear到在胶片下方没看到primer的残留,只看到胶片中间一片闪亮亮
DNA的用量目前大约2ng/15ul
总之目前打算再try primer浓度
因为目前使用的PCR耗材是从冰箱里挖出来的
(我已经到职要来做实验了,但是前任没来跟我交接
不得已只好在冰箱里东挖西挖挖出来上面写taq的东西,
我查上面的编号似乎是伯昂的产品,然後什麽时候买的和说明书通通没看到)
我主要想问的是有人遇过非常严重的smear靠着换hot start taq而解决的吗
还有就是大家try一组新的primer大约会try多久
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.160.249.159
1F：推 pp33:is that tag Super-therm Gold? if it is, it might solve 08/18 00:06
2F：→ pp33:your problem since this tag is the one I have been using 08/18 00:07
3F：→ pp33:for multiplex PCR assays for years! It works fine to me! 08/18 00:08
4F：→ ookubo:你那罐taq上头写得名称是啥？还有请问一下，你用多少量？ 08/18 08:34
5F：→ fc01:写cat. JMR-801/420,我用量是0.075ul/15ul,以5U/ul来算大约是 08/18 20:08
6F：→ fc01:0.375U/15ul 08/18 20:08