作者john00300j (家low)
看板Biotech
標題[求救] 成功不了的TRANSFORMATION(定點突變)
時間Fri Aug 14 23:44:46 2009
我目前是在做定點突變，使用INVITROGEN KIT，但是PCR後的產物作TRANSFORM後
使用BL 21，
無法長出任何COLONY，請問有經驗的高手是否能提供依些可能的原因?
^Q
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◆ From: 59.112.174.9
1F：→ turtle24:產物對細菌有毒性? 08/14 23:57
2F：推 aceliang:kit裡面不是有附competent cell? 08/15 00:32
3F：→ john00300j:PCR產物是有clean過 ，但dna對細菌應該是無毒性，除非 08/15 01:00
4F：→ john00300j:是因為突變過後?? 有這個可能嗎?? 08/15 01:01
5F：→ john00300j:有 但他付的COMPETENT CELL我們DNA無法表現 08/15 01:02
6F：→ john00300j:作好多次都做不出來 快昏了@@+ 08/15 01:05
7F：→ turtle24:我指的是蛋白質產物有毒性 / 或是用錯抗生素? 08/15 01:49
8F：→ melodyrabbit:先看competent cell長不長得出來再說.. 08/15 02:02
9F：→ john00300j:抗生素是確定的 而"突變後"蛋白質產物有無毒性不知道 08/15 02:25
10F：→ john00300j:我也有朝這方面懷疑 不過不能肯定 08/15 02:26
11F：→ john00300j:COMPETENT CELL做過CONTROL 是健康的^^ 08/15 02:27
12F：推 sheepfeather:我們家enzyme那些是都分開買 做得滿ok的 08/15 04:05
13F：→ john00300j:我有做過另一點，是OK ，唯獨此點= =不知道發生甚麼事 08/15 04:47
14F：推 pettra:我有用過kit附的 跟我們家自己做的DH5a 都ｏｋ 08/15 07:02
15F：推 pettra:原PO的DNA如果是用做轉染細胞的construct 應該不用擔心毒性 08/15 07:07
16F：→ pettra:的問題＠＠.. 08/15 07:08
17F：推 tsubasawolfy:先用kit附的compotent cell做出DNA再送BL21 08/15 07:17
18F：→ john00300j:恩 是喔~，所以蛋白部會有毒了，那就又排除了一個可能@ 08/15 22:54
19F：→ john00300j:先謝謝大家的寶貴意見及經驗 08/15 23:16