作者john00300j (家low)
看板Biotech
标题[求救] 成功不了的TRANSFORMATION(定点突变)
时间Fri Aug 14 23:44:46 2009
我目前是在做定点突变，使用INVITROGEN KIT，但是PCR後的产物作TRANSFORM後
使用BL 21，
无法长出任何COLONY，请问有经验的高手是否能提供依些可能的原因?
^Q
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.112.174.9
1F：→ turtle24:产物对细菌有毒性? 08/14 23:57
2F：推 aceliang:kit里面不是有附competent cell? 08/15 00:32
3F：→ john00300j:PCR产物是有clean过 ，但dna对细菌应该是无毒性，除非 08/15 01:00
4F：→ john00300j:是因为突变过後?? 有这个可能吗?? 08/15 01:01
5F：→ john00300j:有 但他付的COMPETENT CELL我们DNA无法表现 08/15 01:02
6F：→ john00300j:作好多次都做不出来 快昏了@@+ 08/15 01:05
7F：→ turtle24:我指的是蛋白质产物有毒性 / 或是用错抗生素? 08/15 01:49
8F：→ melodyrabbit:先看competent cell长不长得出来再说.. 08/15 02:02
9F：→ john00300j:抗生素是确定的 而"突变後"蛋白质产物有无毒性不知道 08/15 02:25
10F：→ john00300j:我也有朝这方面怀疑 不过不能肯定 08/15 02:26
11F：→ john00300j:COMPETENT CELL做过CONTROL 是健康的^^ 08/15 02:27
12F：推 sheepfeather:我们家enzyme那些是都分开买 做得满ok的 08/15 04:05
13F：→ john00300j:我有做过另一点，是OK ，唯独此点= =不知道发生甚麽事 08/15 04:47
14F：推 pettra:我有用过kit附的 跟我们家自己做的DH5a 都ｏｋ 08/15 07:02
15F：推 pettra:原PO的DNA如果是用做转染细胞的construct 应该不用担心毒性 08/15 07:07
16F：→ pettra:的问题＠＠.. 08/15 07:08
17F：推 tsubasawolfy:先用kit附的compotent cell做出DNA再送BL21 08/15 07:17
18F：→ john00300j:恩 是喔~，所以蛋白部会有毒了，那就又排除了一个可能@ 08/15 22:54
19F：→ john00300j:先谢谢大家的宝贵意见及经验 08/15 23:16