作者a343408065 (寂寞東京鐵塔)
看板Biotech
標題[求救] 有關protein純化
時間Tue Aug 4 21:57:41 2009
最近我在純化protein時一直有無法denature完全的問題
我們純化的protein是inclution body
我們目前是用6M urea去denature 破菌後的離心pellet
denature 兩小時後再離心取上清液去通Nico column
denature時也確實有混合均勻
但跑SDS-PAGE出來的結果
還是發現有很多protein殘留在不要的pelet裡
想請問真的是需要提高濃度才能完全純化出我們要的蛋白嗎
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.40
1F：→ turtle24:離完心之後再用一些buffer去回溶看看還能不能溶出東西 08/04 22:03
2F：→ a343408065:就是溶完跑PAGE發現還是沒denature出來...... 08/04 22:08
3F：推 egoweaver:也可以試試看增長denature的時間，我自己是放在冷房過夜 08/04 23:06
4F：推 wensing:提高溫度 或 延長時間 或加入DTT or β-ME 或用 GdnHCl 08/05 11:37
5F：推 ambercandy:我只前都是用超音波破菌的，效果來不錯 08/12 21:29