作者a343408065 (寂寞东京铁塔)
看板Biotech
标题[求救] 有关protein纯化
时间Tue Aug 4 21:57:41 2009
最近我在纯化protein时一直有无法denature完全的问题
我们纯化的protein是inclution body
我们目前是用6M urea去denature 破菌後的离心pellet
denature 两小时後再离心取上清液去通Nico column
denature时也确实有混合均匀
但跑SDS-PAGE出来的结果
还是发现有很多protein残留在不要的pelet里
想请问真的是需要提高浓度才能完全纯化出我们要的蛋白吗
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.40
1F：→ turtle24:离完心之後再用一些buffer去回溶看看还能不能溶出东西 08/04 22:03
2F：→ a343408065:就是溶完跑PAGE发现还是没denature出来...... 08/04 22:08
3F：推 egoweaver:也可以试试看增长denature的时间，我自己是放在冷房过夜 08/04 23:06
4F：推 wensing:提高温度 或 延长时间 或加入DTT or β-ME 或用 GdnHCl 08/05 11:37
5F：推 ambercandy:我只前都是用超音波破菌的，效果来不错 08/12 21:29