作者Loofah1008 (淑女在房間曬蝦)
看板Biotech
標題[求救] Western有很多 non-specific 的bands
時間Mon Aug 3 13:37:02 2009
小妹非Western達人，有請高手幫忙
不知道為何，我只要是poly-anti rabbit的抗體 一律會壓出此類的狀況
就是一整個non-specific的band
如圖
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=eleisonhsu&b=1&f=1225232433&p=0
上面那張是beta-actin，下面那張是我要壓的蛋白質
我想要看到的sizes大約是在24kD
可是我看不到任何一條可以稱為是有壓到的專一性的band
重作很多次也一樣 由於是overexpression的protein 我也沒有postive的control
現在很苦惱，不知道該怎麼辦，實驗室很少人做，也沒有可以參考的前例
我沒有定量sample，不過大約是60ug
一抗是1:500 O/N
二抗1:2500 1hr 還故意用BSA做blocking
WASH 10 min*9次 完全照一般的PROPOCAL
不知道是否有人可以給點意見? 請高手救我!!>< PLEASE~
十分感激!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.85.86
1F：推 tsubasawolfy:個人意見是non specific都這麼強了 target protein 08/03 15:08
2F：→ tsubasawolfy:還沒看到就是沒有expression... 08/03 15:08
3F：→ Loofah1008:有道理，感謝樓上，瞭解THX 08/03 15:55
4F：→ bobbygau:應該把完整protocol寫出來，比較好抓問題。如果你連actin 08/03 16:40
5F：→ bobbygau:都這麼髒，技術要再練練哦。確定抗體能用嗎? 08/03 16:42
6F：→ Loofah1008:跟PAPER是用同一隻~蛋白質相關技術真的很不上手ˊˋ 08/03 19:42
7F：推 soceress:有的時候用BSA blocking會比較髒..有試過脫脂奶了嗎?? 08/07 11:06